製藥企業潔淨室的汙染源（yuán）及鑒定（dìng）

   製藥企業潔淨室常需進行環（huán）境微生物的監控，以確保生產環境（jìng）的潔（jié）淨以及不（bú）會造成藥品的（de）汙染。製藥企業潔淨室常見的汙染源如下（據中國食（shí）品藥品檢定研究院在2018年全國藥品微生物檢驗控製技術精（jīng）要培訓班上的講座ppt）：

1、人。攜帶（dài）的微生（shēng）物主要有：金葡、表葡、八疊球菌、不動杆菌、產堿杆菌、親脂性酵（jiào）母、皮膚真菌等。

2、空氣。攜帶的微生（shēng）物主要（yào）有：微球菌屬、芽孢杆菌屬、葡萄球菌屬、棒狀杆菌、曲黴、青（qīng）黴（méi）。

3、設備、牆麵、地麵表麵。存留的微生物主要有：假單胞菌、表葡、芽孢杆菌等。

4、原材料及包裝材料（liào）。攜帶的微（wēi）生物（wù）有：乳杆菌、假單胞菌、芽孢杆菌、鏈球菌、梭菌、黴菌（枝孢屬、青黴屬、曲黴屬（shǔ））。

5、水。水中的（de）微生物主要有：假單胞菌、產堿杆菌、寡（guǎ）養單胞（bāo）菌、洋蔥伯克霍（huò）爾德菌、皮氏伯（bó）克霍爾德菌、甲基杆菌屬（shǔ）、沙雷氏（shì）菌、黃（huáng）杆（gǎn）菌等。

 許多企業為了鑒定菌種，常將大量資金用（yòng）於微生物全自動鑒（jiàn）定（dìng）儀器和相關試劑的購買。其實，一些微生物生化鑒定試劑盒（無須軟件和儀器）、鑒別培養基和PCR試劑盒（hé）即可完成常見菌種的鑒（jiàn）定工作。

 對於以上紅色標出的菌種或菌屬，已知（zhī）均可用HiMedia生產的生化鑒定試劑盒去作鑒定。其生化鑒定（dìng）試劑盒包含有生化鑒定卡及（jí）輔（fǔ）助試劑（jì），每個生化鑒定卡上有12個（gè）孔，預置相關的培養基和生化試劑，對應12種生化反應。反應完成（chéng）後，通過試劑盒內（nèi）提供的結果詮釋表和菌種標準表，即可人工完成菌種鑒定。其試劑盒覆蓋大部分常見菌種，準確度高，在歐盟和美國FDA均有產品注冊。

上麵的常見菌群中，金葡、表葡可用葡萄球菌的生化鑒定試劑盒（貨號KB004）進行鑒定，不動杆菌、芽孢杆菌、乳杆菌、鏈球菌均有相應的生化鑒定試劑盒。假單胞菌、洋蔥伯克霍（huò）爾德菌可用非發酵（jiào）菌生化鑒定試劑盒（貨號KB019）進行鑒定（dìng）。沙雷氏菌屬於腸杆菌科，可用（yòng）腸杆菌科的（de）生化鑒定（dìng）試劑（jì）盒（貨號KB003）進（jìn）行鑒定。

 對於黃色部（bù）分的菌種：寡養單胞菌，又稱嗜麥芽窄（zhǎi）食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)，舊名“嗜麥芽假單胞菌”。它和皮氏伯克霍爾德菌、黃杆菌均（jun1）可用非發酵菌試劑盒進行鑒定。

 對（duì）於藍色部分的菌種：

1、微球菌屬。最常（cháng）見為藤黃微（wēi）球菌（Micrococcus luteus）。其為革蘭氏陽性，與葡萄球菌近似，菌落光滑，顏色呈黃或紅色。為條件致病菌，廣泛存在於自然界。《伯傑氏細菌鑒定手冊》指出，其接觸酶陽性，無運動性，可利（lì）用乙酸鹽、乳酸鹽和丙酸（suān）鹽，不產生吲哚。依據生化特征鑒別藤黃（huáng）微球菌時，主要依據其在含糖的複雜培養基上好氧的生長而不產（chǎn）生可察覺的酸。其菌落呈黃色、黃（huáng）綠色或橙色。具體（tǐ）鑒定，可采用如下方案：1）先革（gé）蘭氏染（rǎn）色，觀察鏡下形態，如為球形，革（gé）蘭陽性，且疑為葡萄球菌或微球菌。2）可采用“葡萄球菌和微球菌發酵培養基”（英文名Fermentation HiVeg Medium for Staphylococcus and Micrococcus，貨號（hào）#MV827），以區分微球菌和葡萄（táo）球菌。其原理是，培養（yǎng）基中包含葡萄糖，葡萄球菌能厭氧產酸（suān），而微球菌不能。培養基含有的溴甲酚紫為pH指示劑（jì），可指示產酸帶來的pH變化。該液體（tǐ）培養基含有少量瓊脂，因而創（chuàng）造出厭（yàn）氧環境。培養18-24小時後（hòu），如果是藤黃微球菌，則反應管沒有顏色變（biàn）化（huà），而葡萄球（qiú）菌的管變為金黃色。

 2、八疊球菌屬：屬於消化球菌科，細胞球形，呈八個或更多細胞的立方堆狀。可形成芽孢，革蘭陽性。可發酵葡萄糖，產酸，專性厭氧，在pH1到9.8均可生長。無接觸酶。鏡下應不（bú）難辨認。

 對於產堿杆（gǎn）菌，它（tā）與產（chǎn）堿假單胞菌非常近似，它的鑒（jiàn）別特征（zhēng）是在含有蛋白腖的肉湯培養（yǎng）基中產氨，使pH上升。糞產堿杆菌最常見，它在碳水化合（hé）物培養基上呈強烈的產堿反應。木糖氧化產堿杆菌（jun1）使OF葡萄糖培養基和OF木糖培養基產（chǎn）酸（suān）。本菌能（néng）還原亞硝酸鹽，而（ér）不能還原硝酸鹽。因而，采用OF基礎培（péi）養基（英文名：OF Basal HiVegTM Medium，貨號MV395）和相應（yīng）的糖溶（róng）液可鑒別（bié）產堿杆菌。

 對於棒狀杆菌（jun1），它屬於革蘭氏陽性大（dà）杆菌，接觸酶陽性。可采用碲酸鹽血瓊脂平板進行分（fèn）離培養，棒狀杆菌菌落呈灰黑色（sè）。

 對於甲基杆菌，可采用PCR 法（fǎ）擴增菌株的16S rDNA 和甲（jiǎ）醇脫氫酶大亞基的 mxaF 基因，擴增產物進行測序，在NCBI數據庫中用BLAST 進行比對，並用MEGA4.0軟件進行係統進化樹分析。甲基杆菌為革蘭陰性，氧（yǎng）化酶和接觸酶陽性。

對於梭菌，大部分為嚴（yán）格厭氧菌。在《伯傑細菌鑒定手冊》中（zhōng）給出了（le）一個表，主要根據糖發酵來鑒定梭（suō）菌屬內的各個菌種。HiMedia公司提供了一種包含35種糖發酵（jiào）的試劑盒（貨號KB009），因而（ér）可用於梭（suō）菌的（de）鑒定。

對於真菌，如親脂性酵母和黴菌（枝孢屬（shǔ）、青黴屬、曲黴屬），首先從形態上可區分細菌，也可區分酵母和（hé）黴菌，黴菌（jun1）常常有絲狀菌絲。不同黴菌，有些從形態上也可區分。青（qīng）黴菌屬帚狀枝是根據青黴菌屬特征性結果，根（gēn）據菌落特征、分生孢（bāo）子（zǐ）梗、帚狀枝、瓶梗和分生孢子形態特征（zhēng），就可鑒定到屬甚至種水（shuǐ）平。曲黴（méi）具有有隔菌（jun1）絲、分生孢子梗和（hé）特殊的分生孢子頭結構，易與其他菌屬真菌區別。還可根據（jù）SDA或PDA平板上生長的快慢、菌落形態、分生孢子梗等進一（yī）步鑒別。HiMedia也提供了一款鑒別培養基，貨號M1127，可區分巴西（xī）曲黴、黃曲黴（méi）和寄生曲黴。

總之，對於製藥企業潔淨室的常見（jiàn）菌，通過形態染色、生化鑒定（可采用市麵上提供的生化鑒定試劑盒）、PCR產物測序等手段，已足以滿足鑒定的需求，從而完成溯源和診斷的任務。

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